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建CAS9/sgRNA载体胞内活性检测


 威斯腾生物技术中心提供多种sgRNA活性检测方法,包括SSA luciferase报告系统、Surveyor法、Q-PCR、突变点基因测序等

1 SSA检测:根据客户要求检测sgRNA的活性及敲除效率,客户也可以选购我公司Precut pSG-target Cloning kit自行构建报告载体用于检测,我公司提供阳性及阴性sgRNA及其SSA report target质粒。

2 检测原理:SSA报告质粒(pSG-target)中luciferase基因被终止密码子提前终止,这种截短的luciferase没有活性。为检测sgRNA的剪切活性,将Cas9/sgRNA的靶点序列插入到终止密码子之后。在Cas9和sgRNA的作用下,靶点位置的序列被有效剪切形成DSB,细胞通过同源重组重新形成有活性的luciferase,通过检测luciferase的活性升高就可以反应Cas9/sgRNA的剪切活性。


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