黄曲霉毒素M1检测试剂盒 YJ2003报价/价格乳品(牛奶羊奶奶粉)检

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黄曲霉毒素 M1 快速检测试剂盒说明书 一、原理 本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物黄曲霉毒素 M1 将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争黄曲霉毒素 M1 抗体,加入酶标记物后,用 TMB 底物显色,样本吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素 M1 的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物黄曲霉毒素 M1 的含量。 二、试剂盒特性 试剂盒灵敏度: 0.03ppb 孵育温度: 25℃ 孵育时间: 30min~15min 样本检测下限 牛 奶 0.3 ppb 奶 粉 0.12ppb 交叉反应率 黄曲霉毒素 M1 100% 样本回收率 牛 奶 90±25% 奶 粉 85±25% 三、试剂盒组成 1 微量测试孔 每条 8 孔,一板 12 条 标准液×6 瓶 0ppb 0.03ppb 2 0.06ppb 0.12ppb (1ml/瓶) 0.24ppb 0.48ppb 3 酶标记物 7ml 红色帽 4 抗体工作液 7ml 蓝色帽 5 底物 A 液 7ml 白色帽 6 底物 B 液 7ml 黑色帽 7 终止液 7ml 黄色帽 8 20X 浓缩洗涤液 40ml 白色帽 9 2X 浓缩复溶液 50ml 透明帽 四、所用仪器、试剂 具备的仪器:酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮吹仪、恒温箱、打印机 微量移液器:单道 20~200l、单道 100~1000l、 多道 30~300 l 试 剂:乙*、乙酸乙酯 五、样本前处理步骤 样本处理前须知 (a)实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。 (b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。 样本前处理需配制:配液 1 样本复溶液: 用去离子水将 2×浓缩复溶液按 1:1 稀释。 配液 2 样本提取液: 将乙*与乙酸乙酯按 1:2 比例混合均匀(1份乙*+2 份乙酸乙酯)。 样本处理: (a)牛奶样本处理方法(适用于乳饮料): 1、 取牛奶样本 100l,加入 900l 去离子水,充分 振荡混匀;2、 取 50l 用于分析。 样本稀释倍数: 10 倍 (b) 奶粉样本处理方法: 1、 取 1.0±0.05g 奶粉样本于 50ml 离心管中;加入3ml 去离子水,再加入 8ml 样本提取液,充分振荡 3min,20℃ 4000r/min 以上离心 10min;2、 移取 2ml 上层清澈液到另一离心管中,50-60℃ 氮气流下干燥;3、 用 1ml 正己烷溶解干燥的残留物,再加入 1ml 样本复溶液充分混合 30s;20℃ 4000r/min 以上离心 10min;去除上层正己烷相; 4、 取 50l 用于分析。 样本稀释倍数:4 倍 六、 酶标免疫分析程序: 测定前应须知: 1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温(20~25℃)。 2、 使用之后立即将所有试剂放回 2~8℃。 3、 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点。 4、 所有恒温孵育过程,避免光线照射,用盖板膜盖住微孔板。 操作步骤: 1、 从 2~8℃冷藏环境中取出所需试剂,室温(20~25℃)平衡 30min 以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2、 取出框架及需要数量的微孔,将不用的微孔放 入自封袋,保存于 2~8℃。 3、 配液:将 40ml 浓缩洗涤液(20 倍浓缩)用去离子水按照 1:19 稀释(1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。 4、 编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做 2 孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。 5、 加标准品/样本 50l/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物 50l/孔,再加入 50l/孔的抗体工作液,用盖板膜盖板,轻轻振荡混匀,25℃环境 反应 30min。 6、 将孔内液体甩干,用稀释后的洗涤液 250l/孔洗板 4~5 次,每次间隔 15~30 秒,用吸水纸拍干(拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破)。 7、 显色:加入底物 A 液 50l/孔,再加入底物 B 液 50l/孔,轻轻振荡混匀,25℃环境中避光显 色 15min。 8、 测定:加入终止液 50l/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于 450nm 处(建议用双波长 450/630n m 检测,5min 内读数),测定每孔 OD 值。 七、结果判定 结果判定有两种方法,粗略判定可用第 1 种方法,定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素 M1 量成负相关。 1、粗略判定: 用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本 1 的吸光度值为 0.3,样本 2 的吸光度值为 1.0,标准液吸光度值分别是: 0ppb 为 2.243;0.03ppb 为 1.816;0.06ppb 为 1.415; 0.12ppb 为 0.74;0.24ppb 为 0.313;0.48ppb 为 0.155。则样本 1 的浓度范围是 0.24ppb~0.48ppb;样本 2 的浓度范围是 0.06ppb~0.12ppb,乘以其对应的稀释倍数?为样本中黄曲霉毒素 M1 实际浓度。 2、定量分析 (1)百分吸光率的计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准(0 标准)的吸光度值,再乘以 100%,即 B 百分吸光率(%)= ×100% B0 B标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B00ng/ml 标准溶液的平均吸光度值(2)标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光率为纵坐标,以黄曲霉毒素 M1 标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素 M1 实际浓度。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的准确、快速分析。(欢迎来电索取) 八、 注意事项 1、 室温低于 25℃或试剂及标本未回到室温(20~ 25℃)会导致所有标准的 OD 值偏低。 2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会伴随着标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。 3、 混合要均匀,否则会出现重复性不好的现象。 4、 反应终止液为 2M 硫酸,避免接触皮肤。 5、 不要使用过了有效日期的试剂盒;稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD 值变化;不要交换使用不同批号的盒中试剂。 6、 不用的微孔板放进自封袋重新密封;标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。 7、 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。标准品 1 的吸光度值小于 0.5 时,表示试剂可能变质。 8、 该试剂盒最佳反应温度为 25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。 九、储藏条件和保质期 1、 储藏条件:试剂盒于 2~8℃保存,不要冷冻。 2、 保 质 期:该产品有效期为 1 年,生产日期见包装盒。 提示:酶标板真空包装袋若有漏气,酶标板仍然正常有效,不影响实验结果,请放心使用。 农业部生物毒素检测重点实验室 联合研制

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